近年來，以微生物挑戰試驗作為測試和評價化妝品的防腐效能已經逐步被國內外化妝品生產企業接受和推行，這是基于微生物挑戰試驗能夠模擬化妝品生產和使用過程中受到高強度的微生物污染的潛在可能性和自然界中微生物生長的最適條件，使簡測試結果更接近“殘酷的現實”，能經受“嚴峻的考驗”，從而為保證產品避免由微生物污染造成的損失和保障消費者的健康提供可靠的保證。雖然，目前世界各國及其有關組織對化妝品微生物挑戰試驗還未有一個統一的方法，但其基本設計則是相同的，這就是，在待測樣本中人為地接種若干種類、一定數量的微生物，在適當的溫度下存放，定期分離樣本的微生物，并根據微生物的數量變化情況評價樣本的抗菌效能。不過，在微生物挑戰試驗的具體操作步驟里，不同國家和組織采用的測試菌種、接種方式、分離時間等還是有差異的，評價方法自然也有所不同，下面是幾個典型的例子。

1.CTFA的方法初始的霉菌和細菌的接種量分別為104cfu/g（mL）和106cfu/g（mL），要求在第7天時霉菌降低90%，細菌降低99.9%，并且在28天內菌數持續下降。美國在CTFA評價方法的基礎上提出更為嚴格的標準，即，若單菌接種的三個平行試驗中任何一種微生物數量的平均值，在第七天時下降到100 cfu/g（mL）以下，28天全部為0，則視為效果優良；通過挑戰試驗若第七天時下降到1000 cfu/g（mL）以下，則視為勉強通過：若單菌接種的任何一種微生物，任何一個平行樣達不到上述標準，也達不到CTFA的要求，防腐體系則評定為無效。

2.S&M KOKO試驗方法，每星期在25g同一樣品中接種0.1mL 108 cfu/g~109 cfu/g（mL）的混合菌液，連續6星期，若每星期接種前的菌數下降至10 cfu/g（mL）以下，則視為合格。

根據目前國內生產企業的現狀，特別是通過大量的實際測試數據分析和跟蹤調查，提出了以下供化妝品企業參考的評價標準：[初始接種量細菌106 cfu/g~103 cfu/g（mL）]：

①第28天時，樣品中含細菌或霉菌＞103cfu/g（mL）該樣品不能通過微生物攻擊的挑戰試驗，表明樣品的防腐體系不能有效地起到抑制微生物的作用，產品在生產、貯藏和使用中很容易受到微生物的污染。

②第28天時，樣品中含細菌或霉菌在102 cfu/g~103 cfu/g（mL），該樣品有條件地通過挑戰試驗，即當產品中蛋白質或其他動植物材料成分不是特別高，同時生產的衛生環境符合要求，包裝物不易發生二次污染時，該防霉體系可以使用，否則不能。

③第28天時，樣品中含細菌或霉菌在10 cfu/g~102 cfu/g（mL），表明該樣品的防腐體系對微生物有較強的抑殺效果，通過挑戰試驗，產品在生產、貯藏和使用時不容易受到微生物污染。

④從第7天起，樣品中的細菌或霉菌＜10 cfu/g（mL），說明該樣品的防腐體系對微生物有特強的抑殺作用，通過挑戰試驗，產品在生產、貯藏和使用時很不容易被微生物污染。

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